Vikipedija

Polimerazinė grandininė reakcija: Skirtumas tarp puslapio versijų

Naršyti istoriją interaktyviai
← Prieš tai darytas keitimasKitas pakeitimas →
Ištrintas turinys Pridėtas turinys
VizualusVikitekstas
Nėra keitimo santraukos
Eilutė 8:
 
== DNR polimerazė ==
Greta pradmenų, į reakcijos tirpalą dedama [[DNR polimerazės|DNR polimerazė]] ir visų jai veikti reikalingų cheminių medžiagų. Kadangi mišinys bus kaitinamas, šis fermentas turi būti iš karščiui atsparaus organizmo.
 
Šios reakcijos sąlygomis DNR polimerazė tuomet gali sintetinti DNR grandinę, tęsdama ją nuo prikibusio pradmens:
Eilutė 17:
== Reakcijos žingsniai ==
 
# Denatūravimo fazė - reakcijos tirpalas yra pakaitinamas iki 95 C<sup>o</sup>. Dėl karščio suyra „išsilydo“ dviguba DNR spiralė į dvi atskiras viengubas grandines. Tai yra reikalinga, kad pradmenų sekos galėtų sudaryti jungtis su kopijuojama DNR.
# Reakcijos tirpalas pakaitinamas tiek, jog dauginamos DNR grandinės atsiskiria viena nuo kitos.
# Hibridizacijos fazė - tirpalas atvėsinamas. Vėstant tirpalui DNR vėl sudaro dvigrandę struktūrą. Pirmiausia susijungia trumpesnės DNR sekos. Jeigu tirpalas būtų vėsinamas iki kambario temperatūros išnaujo susijungtų visa mėginio DNR, tačiau tirpalas yra vėsinamas iki optimalios temperatūros, kada kopijuojama DNR ir primeriai sudaro dvigrandę struktūrą.
# Tirpalas vėl atvėsinamas. Dalis dauginamos DNR grandinių vėl sukimba, tačiau kitais atvejais ties dauginamą fragmentą ribojančiomis sekomis ant dauginamos DNR užsėda tą seką atitinkantys pradmenys.
# TirpalePailginimo esantifazė - tirpalo temperatūra pakeliama iki DNR polimerazės optimalios veikimo temperatūros. DNR polimerazė atpažįstapradeda pradmenisveikti ir pradedapratęsia juosvisas tęstidvigrandes DNR, sintetindamaprie naująkurių ji gali prisijungti, tame tarpe ir pradmenio-kopijuojamos DNR sekas. Gaunamos dvigrandės DNR, kurių viena grandinė yra senoji, kuri veikė kaip šablonas, ir kita naujai susintetinta (padauginta).
 
# Reakcijos tirpalas vėl pakaitinamas, kad DNR grandinės atšoktų viena nuo kitos. Gaunamas tirpalas, panašus į turėtą pirmajame metodo žingsnyje, tačiau viengrandžių DNR fragmentų jau yra daugiau (prie anksčiau buvusių prisideda naujai susintetinti). Galima tęsti antrą ir po jo sekančius algoritmo žingsnius, kiekvieną kartą kaupiant vis daugiau DNR:
Kiekvienąkart pakartojus algoritmą, tiriamosios DNR sekos tirpale padaugėja maždaug dvigubai. Todėl reakcija vadinama grandinine. Šios trys fazės kartojamos iki kol išsibaigia reagentai ir sulėtėja DNR dvigubėjimas:▼
 
[[Vaizdas:pcr.png|center|400px]]
 
 
▲Kiekvienąkart pakartojus algoritmą, DNR tirpale padaugėja maždaug dvigubai. Todėl reakcija vadinama grandinine.
 
== Galimybės ==
Rodomas puslapis "https://lt.wikipedia.org/wiki/Polimerazinė_grandininė_reakcija"