Chromosomų dažymas

Šiam straipsniui ar jo daliai trūksta išnašų į patikimus šaltinius. Jūs galite padėti Vikipedijai pridėdami tinkamas išnašas su šaltiniais.

Chromosomų dažymas – technika, leidžianti identifikuoti atskiras chromosomas ar jų sekas, vertinti jų struktūrą (ruožuotumą) ir funkciją.

Chromosomų dažymas

Tradiсinis dažymas

Šiuo būdu gaunamos vienodos, neruožuotos chromosomos. Dabar naudojamas ypač retai, dažniausiai identifikuoti chromosomų įtrūkimus, kurie sunkiai pastebimi ruožuose. Naudojamas aceto – orceino dažas, Geimsa dažai (Romanovskio dažų mišinys: Azuro B ir eozinas)

Giemsa dažymas (G-dažymas)

Tai dažniausiai naudojamas chromosomų dažymas rutininei analizei, kuomet gaunami juodi – pilki ruožai ir yra lyginami su standartine ideograma. Prieš dažymą preparatų stikleliai yra sendinami inkubuojant 16-18 val 37 laipsniuose arba kelias paras kambario temperatūroje. Vėliau stikleliai veikiami tripsinu (pašalina chromosominius baltymus – gaunamas didesnis preparato ryškumas), dažomi Giemsa dažais bei fiksuojami ledine acto rūgštimi ir metanoliu. Giemsos ruožuotumo technikos rezultatai gali būti gana nepastovūs, kas priklauso nuo tripsino ekspozicijos, pH ir kt. veiksnių. Daug AT (mažai genų, daug pasikartojančių sekų) turinčios sritys matomos kaip tamsūs ruožai, o daug CG (daug genų) – yra šviesios.

Q-dažymas (Kvinakrino)

Naudojamas kvinakrinas, kuris jungiasi prie DNR. Gaunams panašus ruožuotumas kaip ir G-dažymu, tačiau analizuoti reikia su UV-fluorescentiniu mikroskopu. Q-dažymu galima atpažinti polimorfines 1, 9, 16 ir Y chromosomų heterochromatiną turinčias sritis; akrocentrinių chromosomų satelitinius regionus. Dažymas greitas, patikimas, nereikia sendinti ar veikti kitais preparatais.

C-dažymas (konstitucinio heterochromatino)

Konstitucinį heterochormatiną sudaro pasikartojančios DNR sekos, satelitinė DNR; dažosi tamsiai (C-segmentai) ir yra neaktyvus. Naudojamas prisotintas bario hidroksido tirpalas (denatūruoja euchromatiną). Jis taikomas tiriant chromosomų persitvarkymus netoli centromerų ir analizuojant polimorfizmus.

R-dažymas (reversinis)

Gaunamas „inversinis“ G-dažymo vaizdas. Inkubuojama karštame druskos rūgšties tirpale ir dažoma Giemsa dažais arba oranžiniu akridinu.

NOR dažymas (angl. „nucleolar organizing region“)

Padeda identifikuoti akrocentrinių chromosomų (13,14,15,21 ir 22) trumpuosiuose pečiuose esančius satelitus, kur yra daug RNR genų. Jų dydis gali būti įvairus (vertinamas kaip polimorfizmas). Naudojamas sidabro nitratas (selektyviai jungiasi prie baltymo esančio šalia NOR).

DA-DAPI

DAPI (4,6-diamino-2-fenilindolas) ir DA (distamicinas) – atpažįsta A+T jungtis. Padeda vertinti 1,9,16, 15 i Y chrmosomų tam tikrus regionus. Taip pat naudojamas atliekant FISH maskuojant mikrosatelitines kartotines sekas.